核酸纯化柱的选择专题1：质粒提取之---核酸纯纯化柱硅胶膜厚度（层数）选择1；交流咨询QQ:1492876083

核酸纯化柱的选择专题1：质粒提取之---核酸纯纯化柱硅胶膜厚度（层数）选择1；交流咨询QQ:1492876083

最近艾比根实验室通过比较发现不通层数的硅胶膜即不通厚度（本次测试选择艾比根公司厚度为1mm，孔径为0.7um的硅胶膜进行测试，区别市场上0.5mm厚度的硅胶膜，一层相当于市场上的2层厚度），对核酸提取类型有不通的要求，往往存在误区，大多人误以为试剂盒里面的都是选择一样的厚度，然而这样不能最高效的分离核酸，其实不同公司都在选择最优厚度作为分离核酸的纯化柱，以便达到最佳效果。

基因组DNA;RNA,质粒，胶回收，miRNA对膜的厚度要求都是不一样的，本实验室通过专题测试对比。以便广大用户在使用我们的硅胶膜时可以最高效的应用到您的实验，以便提高您检查的灵敏度。本次专题先选取质粒提取作为研究对象，以判断最佳质粒提取用的膜的厚度（本次测试仅测试本公司艾比根销售的硅胶膜）

其他类型的硅胶膜需要你自行研究测试。本次专题：核酸纯化柱的选择专题1：质粒提取之---核酸纯纯化柱硅胶膜厚度（层数）选择。

测试方法：

通过质粒提取试剂盒测试不同厚度条件下的柱子，吸附核酸的浓度和纯度作为判断标准

实验室设计

测试1：选择实际层数为2,3,4,5,6,7,8,9,10层（1mm厚，相当于市场厚度的一倍，市场大多是0.5mm厚膜，比如天根7层厚度加垫片，可自行拆解观察厚度，不同公司选择厚度不一样），洗脱测试浓度

测试2：由于层数增加洗脱会不完全，本次用100微升大体积洗脱，便于对比洗脱完全

测试3：起始浓度的菌液选取2ml测试（不同收集浓度的菌产量有差别）

测试4：选择PUC19质粒作为提取对象。

实验材料

含PUC19质粒DH5A菌株，分光光度计

实验方法

按照艾比根质粒小量提取试剂盒提取过夜培养的菌液，测定浓度 。


实验结果数据分析

PUC19质粒提取原始测量浓度数据：

膜层数

货号

编号

类型

SW (nm)

SW Abs

260Abs 10mm

280Abs 10mm

260/280

260/230

Conc. (Ng/ul)

2层

P2-50/500/5000

40

dsDNA

260

1.661

1.661

0.777

2.14

2.18

83.1

3层

P3-50/500/5000

41

dsDNA

260

1.679

1.679

0.782

2.15

2.25

84

4层

P4-50/500/5000

43

dsDNA

260

2.035

2.035

0.954

2.13

2.23

101.7

5层

P5-50/500/5000

44

dsDNA

260

2.442

2.442

1.152

2.12

2.2

122.1

6层

P6-50/500/5000

45

dsDNA

260

2.734

2.734

1.259

2.17

2.29

136.7

7层

P7-50/500/5000

46

dsDNA

260

3.092

3.092

1.435

2.15

2.27

154.6

8层

P8-50/500/5000

47

dsDNA

260

3.128

3.128

1.497

2.09

2.25

156.4

9层

P9-50/500/5000

48

dsDNA

260

3.551

3.551

1.643

2.16

2.3

177.6

10层

P1-50/500/5000

49

dsDNA

260

3.119

3.119

1.448

2.15

2.31

155.9

 实验趋势图

说明：本数据仅为艾比根实验室测试，仅供你选择产品时候的参考，不作为你最终产品的使用依据，针对您的配方请自行设计方案测试您的最佳使用条件。

分光光度计测量图


结论：

质粒提取选择要点

  1. 对于需要50ul洗脱体积的建议选择P2-P5厚度的膜，优选P5

  2. 对于洗脱体积大于50建议选择p6-10的膜，优选 p7

  3. 其它厚度的刻自行研究测试

  4. 不同菌液和质粒提取含量有所差别，具体选择生产企业可自行测试

  5. 说明：本次实验仅供参考，只是本实验室实验员操作测试对比数据，不同使用环境请自行研究测试。